خانه > اخبار > اخبار صنعت

چگونه پلاسمیدهای با کیفیت بالا تهیه کنیم؟

زمان بروزرسانی: 2021-01-12

منبع:

بازدید: 58

چگونه پلاسمیدهای با کیفیت بالا تهیه کنیم؟
تجربه صنعت GeneralBiosystems نحوه تهیه پلاسمیدهای با کیفیت بالا را به شما می آموزد.

تهیه پلاسمیدها از کشت های باکتریایی معمولاً شامل دو مرحله است: لیز باکتریایی و تصفیه DNA پلاسمید. لیز قلیایی متداولترین روش برای لیز سلول برای آماده سازی در مقیاس کوچک است. با این حال ، روشهای زیادی برای مراحل تصفیه DNA پلاسمید وجود دارد و این روشها مزایا و معایب خاص خود را دارند ، که ممکن است در کاربرد زیست شناسی مولکولی پایین دست تأثیر بگذارد.

پس از لیز و خنثی سازی سلول ، مقدار کمی DNA کروموزومی فوق لرزیده و پروتئین های سلول دناتوره شده با هم از محلول رسوب می کنند ، در حالی که پلاسمید هنوز در محلول است و سپس می توان رسوب را به راحتی با سانتریفیوژ از محلول جدا کرد یا فیلتراسیون

محلول DNA پلاسمید جدا شده است. اما در این زمان DNA پلاسمید هنوز با پروتئین های سلولی و باقی مانده ، نمک ، EDTA و RNase مخلوط می شود.


بنابراین ، مراحل پاک سازی بعدی برای حذف سایر ناخالصی ها از DNA پلاسمید لازم است. سه روش تصفیه معمولاً به شرح زیر وجود دارد:

روش استخراج فنل - کلروفرم

High-quality gene synthesis plasmid preparation process

مخلوط فنل / کلروفرم آلودگی های پروتئینی و لیپیدی را حل می کند ، در حالی که اسیدهای نوکلئیک در فاز آب باقی می مانند. با این حال ، ممکن است در نمونه نهایی باقی مانده فنل یا کلروفرم وجود داشته باشد که باعث مهار واکنش های آنزیمی پایین دستی می شود.

علاوه بر این ، کلروفرم و فنل برای انسان مضر است. بنابراین از این روش بندرت در تولیدات صنعتی استفاده می شود.



بارش اتانول


بارش اتانول یک روش معمول برای نمک زدایی و غلظت DNA است. اتانول می تواند ساختار DNA را تغییر دهد ، بنابراین DNA می تواند از محلول رسوب کند.

پس از حذف نمک های محلول و مولکول های آلی کوچک ، DNA پلاسمید رسوب داده شده را دوباره معلق کنید. روش بارش اتانول ارزان و م effectiveثر است ، اما همچنین باعث تشدید قطعات RNA و ssDNA می شود.



روش جداسازی ستون تصفیه اسید نوکلئیک (ستون چرخشی)

High-quality plasmid preparation method

نوکلئیک اسید تحت شرایط خاص با سیلیس فاز جامد ترکیب خواهد شد. تغییر شرایط می تواند اسید نوکلئیک را شسته و تصفیه کند. این روش معمولاً در کیتهای مینی پراپ پلاسمید استفاده می شود. این روش راحت و سریع است اما هزینه آن بیشتر است.

بارش اتانول و ستون چرخش از متداول ترین روش ها در صنعت سنتز ژن و شبیه سازی است. تأمین کنندگان بیشتری به دلیل هزینه کمتر از بارش اتانول استفاده می کنند.

GeneralBiosystems دارای تکنولوژی سنتز ژن حرفه ای است. اگر در روند تهیه پلاسمیدهای با کیفیت بالا با مشکلی روبرو شدید ، می توانید از Generalbiosystems کمک بگیرید. ما پرسنل تحقیقاتی علمی حرفه ای برای تهیه و اطمینان از آمادگی با کیفیت بالا داریم.