خانه > اخبار > اخبار صنعت

ویژگی های کاربرد انواع برچسب های بیان و تصفیه پروتئین

زمان بروزرسانی: 2020-11-13

منبع:

بازدید: 45

ویژگی های کاربرد انواع برچسب های بیان و تصفیه پروتئین
برچسب پروتئین به پروتئین یا پلی پپتید گفته می شود که در طی آماده سازی پروتئین نوترکیب با همجوشی با پروتئین هدف بیان می شود. عملکردهای پروتئین برچسب به طور کلی عبارتند از: برای تقویت حلالیت و پایداری پروتئین هدف. برای تسهیل در تشخیص پروتئین هدف. و برای تسهیل تصفیه و بیان پروتئین هدف.

برچسب پروتئین با وزن مولکولی کوچک

این نوع برچسب ها به طور کلی یک توالی پلی پپتیدی است و عملکرد اصلی آن تسهیل تصفیه پروتئین است و همچنین می تواند برای شناسایی و شناسایی پروتئین مورد استفاده قرار گیرد.

به دلیل وزن مولکولی کمی که دارد ، اساساً بر ساختار پروتئین هدف تأثیر نمی گذارد و به طور کلی به صورت تلفیقی با پروتئینی با وزن مولکولی بیشتر بیان می شود.

برچسب های مولکول کوچک معمولاً عبارتند از: 6 * برچسب وی ، برچسب Flag ، برچسب c-Myc ، برچسب HA ، برچسب Arg6 ، AviTag و غیره. برچسب هایی که بیشتر مورد استفاده قرار می گیرند برچسب های 6 * او ، برچسب Flag و برچسب c-Myc است.


برچسب او
کاربرد اصلی: پروتئین همجوشی برچسب وی همچنین برای تحقیقات متقابل پروتئین-پروتئین و پروتئین-DNA استفاده می شود.
امکانات:
1. وزن مولکولی برچسب کوچک است.
2. می توان آن را در حضور / شرایط عدم تغییر سطح سورفکتانت های غیر یونی تصفیه کرد. اولی در تصفیه پروتئین های بسیار آبگریز مورد استفاده قرار می گیرد ، و دومی به ویژه در تصفیه پروتئین های بدن شامل استفاده می شود.
3. می توان آن را برای انواع سیستم های بیان ، با شرایط خلوص خفیف اعمال می شود.
4. می توان آن را با سایر برچسب های میل برای ساخت برچسب های میل والدین استفاده کرد.
5- ایمنی زایی نسبتاً کم است.

برچسب پرچم
برنامه های اصلی: به طور گسترده ای در بیان پروتئین ، تصفیه ، شناسایی ، تحقیقات عملکردی و فعل و انفعالات پروتئین و سایر زمینه های مرتبط ، با کارایی بیان بالاتر در سیستم های بیان یوکاریوتیک استفاده می شود.
امکانات:
1. معمولاً با پروتئین هدف ، که برای محققان انجام تحقیقات پایین دست در مورد پروتئین همجوشی ، تعامل ندارد.
2. پروتئین مورد نظر را می توان مستقیماً تحت کروماتوگرافی میل ترکیبی توسط FLAG قرار داد. این کروماتوگرافی تصفیه غیر دناتوره است ، که می تواند پروتئین همجوشی فعال را با کارایی تصفیه بالا تصفیه کند.
3. توسط آنتی بادی های ضد FLAG قابل تشخیص است ، بنابراین پروتئین همجوشی حاوی FLAG را می توان با Western Blot ، ELISA و سایر روش ها شناسایی و شناسایی کرد.
4- FLAG ذوب شده در انتهای N را می توان با انتروكیناز (DDDK) جدا كرد تا پروتئین هدف خاصی بدست آورد.

از آنجا که برچسب وزن مولکولی کوچک بر ساختار پروتئین تأثیر نمی گذارد ، بنابراین به طور کلی نیازی به حذف نیست ، که می تواند تولید در مقیاس بزرگ را تحقق بخشد.

آنتی بادی هایی با برچسب وزن مولکولی کوچک در بازار وجود دارند که می توانند تشخیص بیان پروتئین را تسهیل کنند. بنابراین ، از برچسب های وزن مولکولی کوچک در آزمایشات و تولید استفاده می شود. بیشترین استفاده


برچسب بزرگ وزن مولکولی

عملکرد اصلی پروتئین بزرگ برچسب دارنده وزن مولکولی ارتقا promote حلالیت پروتئین هدف ، ترویج چین خوردگی صحیح پروتئین و بهبود پایداری است و برچسب بزرگ مولکولی می تواند بیان پروتئین را افزایش دهد.

پروتئین برچسب ماکرومولکولی معمولاً توسط سایتهای محدود کننده به پروتئین هدف متصل می شود ، که برای برداشتن پس از بیان و تصفیه مناسب است.

به دلیل وزن مولکولی زیاد برچسب ، ساختار فضایی ممکن است پروتئین هدف را تحت تأثیر قرار دهد و همچنین می توان از آن بین پروتئین برچسب و پروتئین هدف استفاده کرد.

بین آنها پپتیدهای پیوندی اضافه کنید. برچسب های ماکرومولکولی متداول عبارتند از: برچسب GST ، برچسب Sumo ، برچسب TrxA ، برچسب MBP و غیره


برچسب GST
کاربرد اصلی: سیستم بیان همجوشی GST به طور گسترده ای در بیان پروتئین های مختلف همجوشی استفاده می شود و می تواند در سلول های میزبان مانند E. coli و مخمر بیان شود.
امکانات:
1. این یک پروتئین بسیار محلول است.
2. می تواند به مقدار زیاد در E. coli بیان شود ، که می تواند سطح بیان را افزایش دهد.
3- در اکثر موارد ، پروتئین همجوشی در محلول آبی محلول بوده و تشکیل دیمر می دهد.

برچسب های GST به راحتی توسط آنالیز آنزیمی یا سنجش ایمنی قابل تشخیص هستند. برچسب ها به محافظت از پروتئین های نوترکیب در برابر تخریب پروتئازهای خارج سلولی و بهبود پایداری آنها کمک می کنند.

در بیشتر موارد ، پروتئین همجوشی GST به طور کامل یا جزئی قابل حل است.


برچسب سومو
پروتئین تگ SUMO یک اصلاح کننده کوچک مانند یوبی کویتین است و یکی از اعضای مهم خانواده فوق العاده زنجیره پلی پپتیدی یوبی کویتین است. می تواند به عنوان برچسب پروتئین یا محلی برای تجزیه آنزیم و هیدرولیز استفاده شود.
امکانات:
1. افزایش بیان پروتئین همجوشی
2. مقاوم در برابر هیدرولیز پروتئاز ، در نتیجه باعث جمع شدن صحیح پروتئین هدف می شود
3. حلالیت آب ورق مقصد را بهبود ببخشید
4- می توان آنزیم پروتئولیتیک SUMO را کاملاً برش داد تا پروتئین هدف را بدون برچسب بدست آورد

برچسب های پروتئینی نقش بسیار مهمی در تولید پروتئین های نوترکیب دارند و باعث می شوند بیان و خالص سازی پروتئین های مختلف محقق شود.

در انتخاب برچسب ها در طول آزمایش ، برچسب ها را می توان با توجه به هدف آزمایش انتخاب کرد.

سرویس بیان پروتئین سیستم های بیولوژیک عمومی می تواند بر اساس آزمایشات مشتری باشد. هدف ، سفارشی کردن یک طرح بیان پروتئین مناسب و بیان سریع پروتئین هدف از طریق برچسب های مناسب است.