خانه > اخبار > اخبار شرکت

فرایند فناوری زیر خط بندی --— Generalbiosystems

زمان بروزرسانی: 2020-08-14

منبع:

بازدید: 84

فرایند فناوری زیر خط بندی --— Generalbiosystems

فناوری bcloning Su به کلون سازی مجدد قطعات DNA ژن در صورت بدست آوردن آنها اطلاق می شود ، تا DNA ژن مورد نظر بیشتر تجزیه و تحلیل یا ترکیب شود. فناوری ساب کلونینگ نیز یک فناوری شبیه سازی مولکولی است.

ظهور این فناوری این امکان را به افراد می دهد تا مطالعه دقیق تری در توالی DNA ژن داشته باشند ، عملکرد ژن ها را روشن کرده و فنوتیپ موجودات را از منظر ژنتیک تجزیه و تحلیل کنند.


فرآیند تکنیکی ساب کلونینگ به طور عمده به چهار مرحله تقسیم می شود: بدست آوردن قطعه هدف ، اتصال ناقل هضم شده و قطعه هدف ، انتقال به سلولهای میزبان و شناسایی و غربالگری.


روش بدست آوردن قطعه هدف

قطعه ژن هدف را مستقیماً از کتابخانه ژن بدست آورید.

با استفاده از فناوری PCR ، از mRNA به عنوان الگویی برای رونویسی دنباله cDNA استفاده کنید تا کتابخانه cDNA را بدست آورید و ژن مورد نظر را بدست آورید.

با استفاده از آنزیم های محدودکننده DNA دهنده را به قطعات بسیاری برش داده و به سلول ها وارد کنید. پس از غربالگری ، سلولهای حاوی ژن هدف بدست می آیند.

اطلاعات مربوط به توالی ژن بدست آمده و سنتز مصنوعی در شرایط آزمایشگاهی انجام می شود.


اتصال ناقل هضم محدودیت و قطعه هدف

اندونوکلئاز محدود کننده مناسب را برای برش توالی قطعه هدف بردار انتخاب کنید. در شرایط عادی ، سه حالت وجود دارد: انتهای چسبنده متقارن ، انتهای چسبنده نامتقارن و انتهای صاف. در آزمایش های subcloning ، بستن انتهای چسبنده نامتقارن ترجیح داده می شود ، که می تواند DNA خارجی را به داخل ناقل هدایت کند.


انتقال به سلولهای میزبان

برای انتقال ناقل مرتبط با ژن هدف به سلول ها معمولاً دو روش وجود دارد: تبدیل / ترانسفکشن و انتقال.

انتقال / ترانسفکشن انتقال پلاسمیدهای نوترکیب یا باکتریوفاژها به سلولهای میزبان تحت درمان است. روش انتقال این است که سلولهای میزبان را با ویروسهای حامل DNA خارجی آلوده کند. به طور کلی ، انتقال از کارآیی بیشتری نسبت به روش های تحول برخوردار است.


غربالگری شناسایی

غربالگری سلولهای شبیه سازی شده معمولاً از غربالگری مستقیم استفاده می کند. حامل دارای مارکرهای ژنتیکی قابل شناسایی است ، که می تواند به طور موثری مولکولهای نوترکیب را از سلولهای اصلی تشخیص و جدا کند.

بعد از اینکه برخی مولکول های حامل ژن های خارجی را حمل می کنند ، رنگ کلنی ها یا پلاک های تشکیل شده دارای تغییرات واضحی مانند آبی به بی رنگ است و تغییرات آشکار فنوتیپی رنگ می تواند به وضوح مولکول های نوترکیب را از هم متمایز کند.

علاوه بر این ، برخی دیگر از روش های غربالگری دارو وجود دارد که می تواند سلول های کلون شده را از طریق پدیده های فنوتیپی به طور موثر غربال کند.



Generalbiosystems دارای یک تیم فنی باتجربه و یک پلتفرم سنتز ژن اختراع شده است که می تواند خدمات یکپارچه سازی subcloning یک مرحله ای از جمله سنتز ژن هدف ، ساخت و تبدیل بردار ، شناسایی و غربالگری را به مشتریان ارائه دهد.

در سرویس subcloning ، 4μg DNA پلاسمید پودر خشک ، باکتریهای گلیسرول یا باکتریهای پنچری حاوی پلاسمیدها ، نتایج توالی (فرمت ab1) و اسناد تأیید هضم آنزیم که از بازرسی QC عبور کرده اند ، تحویل داده می شوند. Generalbiosystems خدمات زیر طبقه بندی دقیق و سریع را به مشتریان ارائه می دهد.