خانه > اخبار > اخبار صنعت

چندین استراتژی موثر برای بیان پروتئین

زمان بروزرسانی: 2020-10-28

منبع:

بازدید: 55

چندین استراتژی موثر برای بیان پروتئین
انجمن هر روز خیس می شود و آزمایش هر روز انجام می شود ، اما پروتئین هنوز به خوبی بیان نشده است؟

ویراستار بدینوسیله چندین استراتژی م presentsثر ارائه می دهد که برای به دست آوردن پروتئین نوترکیب عملکردی با عملکرد بالا بسیار م effectiveثر است!

سیستم بیان پستانداران بر مشکل اصلاح پروتئین پس از ترجمه در سیستم بیان پروکاریوتی غلبه می کند.

پروتئین بیان شده دارای عملکردهای جمع شدن و اصلاح است ، بسیار انسانی است و می تواند برای تجزیه و تحلیل ساختاری و عملکردی مورد استفاده قرار گیرد.

برای بیان پروتئین ها در سلول های پستانداران معمولاً دو روش وجود دارد: بیان گذرا و ترانسفکشن پایدار (ساخت رده های سلولی پایدار).


استفاده از ترانسفکشن سلول پایدار برای ترانسفکت ژنهای خارجی به کروموزومهای سلولی می تواند پروتئین مورد نظر را برای مدت طولانی پایدار تولید کند. با این حال ، هزینه آزمایش زیاد است ، چرخه طولانی است و عملیات دشوار است.

بیان پروتئین گذرا به این معنی است که ژن خارجی روی ناقل آزاد وجود دارد و به کروموزومهای سلول ترانسفک نشده است.

پس از ساخت پلاسمید ، می توان پروتئین مورد نظر را از طریق مراحل بازیابی سلول ، ترانسفکشن ، کشت سلول و تصفیه پروتئین بدست آورد.

عملیات ساده است ، هزینه آزمایش کم و چرخه کوتاه است. برای تهیه سریع و در مقیاس کوچک مقدار مشخصی پروتئین نوترکیب و آنتی بادی نوترکیب مناسب است.


بیایید و ببینید چگونه می توان بیان پروتئین گذرا را بهبود بخشید!

استراتژی 1: توالی کدگذاری را بهینه کنید

با توجه به برنامه خاص پایین دستی ، بهترین توالی کدگذاری را طراحی کرده و مناسب ترین بردار بیان را انتخاب کنید. قبل از شروع بیان پروتئین ، استفاده از الگوریتم های بهینه سازی کدون (مانند OptimumGene ™ یا GenSmart Codon Optimization) و یک راهنمای انتخاب بردار بیان می تواند باعث صرفه جویی در وقت ، تلاش و هزینه شود.
میدونی؟ GeneralBiosystems می تواند خدمات تلفیقی از سنتز ژن (بهینه سازی کدون رایگان) تا بیان و خالص سازی پروتئین را ارائه دهد !

استراتژی 2: حلالیت پروتئین را بهبود ببخشید

حلالیت کم پروتئین یک عامل کلیدی است که باعث عملکرد پایین بیان پروتئین نوترکیب می شود. ما پیشنهاد می کنیم برخی از پارامترهای شرط بیان را که معمولاً استفاده می شود تنظیم کنید تا حلالیت پروتئین را بهبود بخشد.

درجه حرارت:

برای HEK293 و سایر رده های سلولی پستانداران ، توصیه می شود سلول ها را در دستگاه جوجه کشی 5 درجه سانتیگراد ، 5٪ CO2 کشت دهید. برخی مطالعات نشان داده است که انکوباسیون دما از 37 درجه سانتیگراد به 33 درجه سانتیگراد 24 ساعت پس از ترانسفکشن می تواند بیان پروتئین سلولهای HEK293 را افزایش دهد.

اگرچه رسانه های پایه ارائه شده توسط تأمین کنندگان مختلف بسیار مشابه هستند ، اما تفاوت های جزئی بین آنها ممکن است بر رشد رده های سلولی بیان کننده خاص تأثیر بگذارد.

اطمینان حاصل کنید که غلظت ، pH ، نوع و حتی تعداد دسته ای یا اجزای سازنده خارجی مانند سرم اضافه شده به محیط کشت را بهینه کنید.


مواد افزودنی متوسط:

در برخی موارد ، ما برای افزایش بیان پروتئین ، معرفهای خاصی را به محیط اضافه می کنیم. به عنوان مثال ، افزودن مهار کننده های هیستون دی استیلاز می تواند کروماتین را از بین برده و فعالیت رونویسی ژن های یکپارچه را افزایش دهد. روش دیگر ، افزودن فاکتورهای رشد ویژه به محیط می تواند به افزایش تولید پروتئین کمک کند.

استراتژی 3: از یک شریک تلفیقی استفاده کنید

برچسب های پروتئینی توالی های کوتاه پپتیدی هستند که در پروتئین های نوترکیب قرار می گیرند و می توانند برای افزایش بیان پروتئین استفاده شوند. معمولاً با هضم آنزیم یا معرفهای شیمیایی در پایان بیان پروتئین از بین می رود.

انتخاب برچسب مناسب برای سیستم بیان خاص به عوامل زیادی بستگی دارد. اگر هدف دستیابی به بازدهی بسیار زیاد است ، باید از برچسب های حل کننده استفاده کنید.

به عنوان مثال ، GST دارای یک سیگنال شروع ترجمه قوی است و می تواند بیان سطح بالایی را ارتقا دهد. با این حال ، در صورت نیاز به سطح بیان پایین تر ، توصیه می شود از برچسب های اپی توپ دقیق تر ، مانند برچسب های His ، استفاده کنید.


استراتژی 4: روش تصفیه را بهینه کنید

روش های مختلف تصفیه را با توجه به برنامه های پایین دستی و نیازهای خلوص طراحی کنید.

اگر سطح بیان پروتئین زیاد باشد ، می توان از روش تصفیه میل ترکیبی یک مرحله ای برای بدست آوردن مقدار و خلوص کافی پروتئین برای تأمین برنامه های مختلف پایین دستی استفاده کرد.

در صورت نیاز به تصفیه بیشتر ، معمولاً می توان کروماتوگرافی حذف اندازه (SEC) را پس از تصفیه میل انجام داد. برای تصفیه بیشتر می توان از کروماتوگرافی تبادل یونی (Ion Exchange ، IEX) استفاده کرد.