خانه > اخبار > اخبار شرکت

برچسب های تصفیه بیان پروتئین

زمان بروزرسانی: 2020-11-10

منبع:

بازدید: 48

برچسب های تصفیه بیان پروتئین
برخی از پپتیدها و پروتئین ها به طور گسترده ای در تولید انبوه پروتئین های نوترکیب استفاده می شوند. آنها برای تسهیل بیان ، تشخیص ، ردیابی و تصفیه پروتئین هدف با پروتئین هدف ذوب شده و بیان می شوند. به این نوع پپتیدها یا پروتئین ها برچسب های پروتئینی گفته می شود. Generalbiosystems با توجه به نیاز مشتری ، از جمله His ، Sumo ، GST ، MBP و ... می تواند از برچسب های بیان پروتئین متنوعی برای ارائه خدمات بیان پروتئین و تصفیه سفارشی استفاده کند.

6 * برچسب وی:


6 * منظور وی از برچسب همجوشی متشکل از شش باقیمانده هیستیدین است که می تواند در انتهای C یا انتهای N پروتئین هدف قرار داده شود.

به عنوان برچسب ، یکی تشکیل یک اپی توپ برای تسهیل تصفیه و شناسایی است. مورد دیگر تشکیل یک ویژگی ساختاری منحصر به فرد (لیگاند اتصال) برای تسهیل تصفیه است.

زنجیره جانبی باقی مانده های هیستیدین جذب زیادی به نیکل جامد دارد و می تواند برای کروماتوگرافی کلاته فلز بی حرکت (IMAC) برای جداسازی و تصفیه پروتئین های نوترکیب مورد استفاده قرار گیرد.


استفاده از برچسب His دارای مشخصات زیر است:


1. وزن مولکولی برچسب کوچک است ، فقط 0.84KD ~ است که به طور کلی بر عملکرد پروتئین هدف تأثیر نمی گذارد.

2. پروتئین فیوژن برچسب وی را می توان در حضور سورفاکتانت های غیر یونی یا در شرایط دناتوره خالص کرد. اولی در تصفیه پروتئین های بسیار آبگریز مورد استفاده قرار می گیرد ، و دومی خصوصاً در تصفیه پروتئین های بدن شامل استفاده می شود.

پس از حل شدن دناتورانت ، پروتئین ناخالصی توسط کروماتوگرافی میل ترکیبی فلز حذف می شود ، به این ترتیب که تجدید حیات توسط پروتئین های دیگر تداخل نمی کند یا کروماتوگرافی میل ترکیبی فلز دوباره اشباع می شود.


3. پروتئین همجوشی برچسب وی همچنین در مطالعه فعل و انفعالات پروتئین-پروتئین و پروتئین-DNA استفاده می شود.

4- برچسب وی ایمنی زایی نسبتاً کمی دارد و پروتئین خالص شده را می توان به طور مستقیم برای تهیه ایمنی آنتی بادی به حیوانات تزریق کرد.

5. می تواند در انواع سیستم های بیان ، با شرایط تصفیه خفیف اعمال شود.

6. می تواند با سایر برچسب های میل برای ساخت برچسب های میل والدین استفاده شود.

برچسب GST


پروتئین تگ GST (گلوتاتیون سولف هیدریل ترانسفراز) به خودی خود ترانسفرازی است که در فرآیند سم زدایی نقش مهمی دارد و اندازه طبیعی آن 26KD است. این ماده عمدتا در بیان پروکاریوتی استفاده می شود.

تقریباً دو دلیل برای کاربرد آن در بیان پروکاریوتی وجود دارد.

یکی به این دلیل که پروتئینی بسیار محلول است و امید است بتوان از آن برای افزایش حلالیت پروتئین های خارجی استفاده کرد. دیگر این که می توان از آن در روده بزرگ استفاده کرد. مقدار زیادی بیان در باسیل در افزایش میزان بیان نقش دارد.


سیستم بیان همجوشی GST به طور گسترده ای در بیان پروتئین های مختلف همجوشی استفاده می شود و می تواند در سلول های میزبان مانند E. coli و مخمر بیان شود.

پروتئین همجوشی محدود با 10 میلی مولار گلوتاتیون کاهش یافته در شرایط غیر دناتوره شسته شد. در بیشتر موارد ، پروتئین همجوشی در محلول آبی حل می شود و یک دیمر تشکیل می دهد.


برچسب های GST به راحتی توسط آنالیز آنزیمی یا سنجش ایمنی قابل تشخیص هستند. برچسب ها به محافظت از پروتئین های نوترکیب در برابر تخریب پروتئازهای خارج سلولی و بهبود پایداری آنها کمک می کنند. در بیشتر موارد ، پروتئین همجوشی GST به طور کامل یا جزئی قابل حل است.

خالص سازی: پروتئین دارای برچسب GST که توسط سیستم بیان بیان می شود می تواند مستقیماً با استفاده از رزین میل ترکیبی حاوی گلوتاتیون کاهش یافته (گلوتاتیونسفاروز) از محلول لیزر باکتری خالص شود.

پروتئین های دارای برچسب GST می توانند تحت شرایط ملایم و غیر دناتوره شسته شوند ، بنابراین آنتی ژنی و فعالیت بیولوژیکی پروتئین حفظ می شود.

GST تحت شرایط دناتوراسیون توانایی اتصال به رزین گلوتاتیون را از دست خواهد داد ، بنابراین نمی توان عوامل باکتریایی قوی مانند هیدروکلراید گوانیدین یا اوره را به بافر تصفیه اضافه کرد.


اگر می خواهید قسمت همجوشی GST را حذف کنید ، می توانید از برش پروتئاز مخصوص سایت استفاده کنید.

تشخیص: از آنتی بادی GST یا آنتی بادی اختصاصی پروتئین هدف بیان شده می توان برای تشخیص استفاده کرد.

برچسب SUMO


پروتئین برچسب SUMO یک اصلاح کننده کوچک مانند یوبی کویتین است (Smallubiquitin-likemodifier) ، و یکی از اعضای مهم خانواده فوق العاده زنجیره پلی پپتیدی یوبی کویتین است.

در ساختار اولیه ، SUMO و ubiquitin فقط 18٪ همسانی دارند ، اما ساختار سوم و عملکردهای بیولوژیکی این دو بسیار شبیه هستند.

مطالعات نشان داده است که SUMO می تواند به عنوان برچسب همجوشی و چاپرون مولکولی برای بیان پروتئین نوترکیب استفاده شود.

این ماده نه تنها می تواند بیان پروتئین همجوشی را بیشتر افزایش دهد ، بلکه دارای عملکرد مقاومت در برابر هیدرولیز پروتئاز ، ترویج چین خوردگی صحیح پروتئین هدف و بهبود حلالیت پروتئین نوترکیب است.


علاوه بر این ، SUMO کاربرد مهمی دارد ، یعنی می توان از آن برای حذف کامل پروتئین برچسب برای بدست آوردن پروتئین طبیعی استفاده کرد.

از آنجا که آنزیم پروتئولیتیک SUMO می تواند توالی کامل پروتئین برچسب SUMO را تشخیص دهد و می تواند به طور مlyثر SUMO را از پروتئین همجوشی برش دهد.

پس از حذف SUMO ، پس از کروماتوگرافی میل ترکیبی ، قسمت پروتئین برچسب برداشته می شود و پروتئین نوترکیب همان پروتئین طبیعی است.

بنابراین ، برچسب SUMO اغلب به عنوان یک سایت خاص هضم آنزیمی همراه با برچسب های دیگر نیز استفاده می شود.


برچسب MBP


پروتئین برچسب MBP (پروتئین اتصال دهنده مالتوز) دارای اندازه 40kDa است و توسط ژن malE E. coli K12 رمزگذاری می شود. MBP می تواند حلالیت پروتئینهای همجوشی را که در باکتریها به ویژه پروتئینهای یوکاریوتی بیان نشده اند ، افزایش دهد. برچسب MBP با سنجش ایمنی به راحتی قابل تشخیص است. لازم است برچسب را با یک پروتئاز مخصوص سایت جدا کنید. اگر پروتئین در باکتری بیان شود ، می توان MBP را در انتهای N یا انتهای C پروتئین ذوب کرد.

خالص سازی: پروتئین همجوشی را می توان با لایه میل میل نشاسته بهم پیوسته خالص کرد. پروتئین همجوشی محدود شده را می توان با 10 میلی مولار مالتوز در بافر فیزیولوژیکی شست. میل اتصال در محدوده میکرومولار است. برخی از پروتئین های همجوشی نمی توانند در حضور 0.2٪ تریتون X-100 یا 0.25٪ توئین 20 به طور موثر متصل شوند ، در حالی که سایر پروتئین های همجوشی تحت تأثیر قرار نمی گیرند. شرایط بافر از pH 7.0 تا 8.5 است و غلظت نمک می تواند تا 1M باشد ، اما نمی توان از دناتورها استفاده کرد. اگر می خواهید قسمت فیوژن MBP را حذف کنید ، می توانید از برش پروتئاز مخصوص سایت استفاده کنید.

تشخیص: برای شناسایی می توان از آنتی بادی MBP یا آنتی بادی اختصاصی پروتئین هدف بیان شده استفاده کرد.