خانه > اخبار > اخبار صنعت

اقدامات احتیاطی برای تصفیه پروتئین در سلولهای پستانداران

زمان بروزرسانی: 2020-12-07

منبع:

بازدید: 36

اقدامات احتیاطی برای تصفیه پروتئین در سلولهای پستانداران
این مقاله به طور عمده اقدامات احتیاطی برای تصفیه پروتئین P در سلولهای پستانداران را معرفی می کند .

خصوصیات اصلی پروتئین نوترکیب تولید شده توسط سلولهای عمومی حیوانی را می توان به شرح زیر خلاصه کرد: ترشح در محیط کشت به صورت طبیعی و به درستی چین خورده. اصلاح صحیح پس از ترجمه ؛ بدون محدودیت در وزن مولکولی پروتئین نوترکیب. سلول های پستانداران اندوتوکسین تولید نمی کنند. غلظت کم محصول ؛ فرهنگ ممکن است محتوای پروتئین در پایه زیاد باشد. فرآیند تولید ممکن است حاوی ویروس ها ، DNA یا پروتئین های سلولی باشد که باید از طریق فرایندهای پایین دست حذف شوند.

mammalian cells


استراتژی های تصفیه پروتئین حاصل از سلول های پستانداران نه تنها باید قابلیت تولید مجدد داشته باشند ، هم نیازهای خلوص خاص و اشکال خاص را داشته باشند ، بلکه آلاینده های بالقوه مضر ناشی از فرآیند آماده سازی را از بین ببرند ، از جمله پروتئین های حیوانی ، ویروس ها و ویروس ها در سلول ها یا فرهنگ ها. . DNA یا آنتی بیوتیک برای کشت سلول و غیره. موارد زیر نیاز به توجه دارند:


requirements الزامات بهداشتی ، تمام مراحل جداسازی باید بتوانند در شرایط آرام کار کنند و هیچ گونه بیو بار یا اندوتوکسین نباید معرفی شود.

مواد اولیه تصفیه شده باید استریل باشد و محتوای اندوتوکسین باید بسیار کم باشد و از آنتی بیوتیک استفاده نشود.


② مواد فرآوری شده را که نمی توان با بخار استریل کرد (مانند حاملهای کروماتوگرافی) باید با روشهای موثر دیگر تمیز و دپیروژن زدایی کرد.

روش های معمول شامل درمان با محلول های ضد عفونی کننده مانند 0.2 m 0.5mol / L NaOH یا اتانول اسیدی (60٪ اتانول / 0.5 مول / L اسید استیک) و مخلوط هیدروکسید سدیم / اتانول (مانند 50٪ اتانول / 0.2mol / L NaOH ) می توان از آن استفاده کرد و زمان درمان به طور کلی 4-24 ساعت در دمای اتاق است.


③ یکپارچگی فرآیند تضمین می کند که محصول می تواند مستقیماً از یک مرحله عملیاتی به مرحله دیگر برود ، بدون اینکه عملیات اضافی در وسط انجام شود ، که ایده آل است.


④ صرف نظر از نیروی مکانیکی یا شرایط نامساعد کشت ، سلول های پستانداران بسیار ضعیف تر از سلول های میکروبی هستند ، بنابراین باید مراقب بود که سلول ها سالم بمانند.

کنترل دقیق شرایط کشت و جداسازی سلول برای جلوگیری از آلودگی محصول توسط پروتئینهای داخل سلولی منتشر شده در اثر لیز سلول ضروری است.


طرح های تصفیه معمول برای پروتئین های نوترکیب یا آنتی بادی های مونوکلونال تولید شده توسط کشت سلولی پستانداران یا حیوانات تراریخته معمولاً شامل جداسازی مقدماتی (فیلتراسیون یا سانتریفوژ ، غلظت فوق فیلتراسیون) ، کروماتوگرافی تبادل یونی (یا میل) ، فیلتراسیون ژل و غیره محصولی با خلوص 99 است. ٪ تا 100٪ بدست می آید.