خانه > اخبار > اخبار صنعت

روش شبیه سازی PCR | مزیت | معایب

زمان بروزرسانی: 2020-08-04

منبع:

بازدید: 94

روش شبیه سازی PCR | مزیت | معایب

تفاوت بین شبیه سازی PCR و شبیه سازی سنتی در این است که می تواند قطعات DNA هدف یا حتی بردارها را با واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) تقویت کرده و بدون استفاده از آنزیم های محدود کننده ، آنها را بهم پیوند دهد.

شبیه سازی PCR یک روش سریع برای شبیه سازی ژن ها است که معمولاً برای پروژه هایی که به توان عملیاتی بالاتری نیاز دارند ، استفاده می شود و توان عملیاتی این پروژه ها بیشتر از روش های شبیه سازی سنتی است. این امکان شبیه سازی قطعات DNA را فراهم می کند که به مقدار زیاد در دسترس نیستند.


معمولاً یک واکنش PCR برای تقویت توالی مورد نظر انجام می شود و سپس قبل از تغییر شکل با بستن برآمدگی انتهایی یا تک پایه یا بردار به بردار متصل می شود.

شبیه سازی اولیه PCR Taq DNA پلیمراز برای تقویت ژن اغلب استفاده می شود.

این منجر به تولید یک محصول PCR می شود که در آن از طریق عملکرد طبیعی پلیمراز ، یک باقیمانده آدنین (A) به 3'انتهای محصول PCR ، که مستقل از الگو است ، اضافه می شود.

سپس این محصولات "A-tail" با استفاده از T4 DNA ligase به یک بردار دم T مکمل متصل شده و سپس تبدیل می شوند.


اکنون ، از پلیمرازهای DNA با قابلیت اطمینان بالا نیز معمولاً برای تقویت توالی هایی که حاوی محصولات PCR 3 بعدی نیستند ، استفاده می شود.

قطعه انتهای بلانت توسط یک واکنش متصل کننده معمولی یا با عملکرد یک بردار "فعال" حاوی یک آنزیم پیوندی کووالانسی (معمولاً توپوایزومراز I) به بردار پلاسمید متصل می شود ، که تسهیل کننده بردار است: بستن درز را وارد کنید.

برخی از سیستم های شبیه سازی PCR شامل بردارهای "خودکشی" مهندسی شده ای هستند که شامل یک ژن سمی است که محصول PCR باید با موفقیت به آن پیوند داده شود تا امکان تکثیر سویه هایی که در طی فرآیند تبدیل مولکول نوترکیب را جذب می کنند ، شود.


یک کاستی معمولی که در بسیاری از روشهای شبیه سازی PCR مشترک است این است که باید از بردارهای ویژه استفاده شود.

این بردارها معمولاً توسط فروشندگان (مانند NEB) در قالب های خطی آماده استفاده به فروش می رسند و می توانند هزینه های قابل توجهی به کل هزینه شبیه سازی اضافه کنند.

به همین ترتیب، استفاده از بردارها SPE cific را محدود انتخاب پژوهشگران برای مقاومت آنتی بیوتیکی، هویت پروموتر، شرکای فیوژن و دیگر عناصر نظارتی.

مزیت شبیه سازی PCR :


✧ کارآمد ، با حامل اختصاصی
مناسب برای توان بالا

معایب شبیه سازی PCR :

انتخاب محدود بردار
هزینه بالاتر
عدم کنترل توالی در محل اتصال
cl شبیه سازی چند قطعه ای آسان نیست
cl شبیه سازی جهت دار دشوار است