خانه > اخبار > اخبار صنعت

روش ها و اقدامات احتیاطی برای تصفیه پروتئین

زمان بروزرسانی: 2020-10-26

منبع:

بازدید: 48

روش ها و اقدامات احتیاطی برای تصفیه پروتئین
اولین قدم در تحقیقات پروتئین ، جداسازی و خالص سازی پروتئین هدف از مخلوط پیچیده ای از ماکرومولک ها برای دستیابی به یک هدف با خلوص بالا با فعالیت بیولوژیکی است. بنابراین ، تکنیک ها و روش های کارآمد تصفیه پروتئین یکی از مبانی مهم و کلید تحقیق در مورد پروتئین است.

روش استخراج و خالص سازی پروتئین

استخراج پروتئین (از جمله آنزیم ها)

بیشتر پروتئین ها در آب ، نمک رقیق ، محلول های اسید رقیق یا قلیایی محلول هستند و چند پروتئین متصل به لیپیدها در حلال های آلی مانند اتانول ، استون ، بوتانول و غیره محلول هستند بنابراین می توان از حلال های مختلف برای استخراج ، جداسازی و تصفیه پروتئین و آنزیم ها.

(1) روش استخراج محلول آبی

محلول آبی نمک رقیق و سیستم بافر از پایداری و حلالیت بالایی برای پروتئین برخوردار است. این رایج ترین حلال برای استخراج پروتئین است.

مقدار معمول 1-5 برابر حجم ماده اولیه است. استخراج برای تسهیل انحلال پروتئین به هم زدن یکنواخت نیاز دارد. دمای استخراج به ماهیت مواد فعال بستگی دارد.


از یک طرف ، با افزایش دما ، حلالیت اکثر پروتئین ها افزایش می یابد. بنابراین ، دمای بالاتر منجر به انحلال می شود و زمان استخراج را کوتاه می کند.

اما از طرف دیگر ، افزایش دما باعث تخریب و غیرفعال شدن پروتئین می شود. بنابراین ، بر اساس این نکته ، استخراج پروتئین ها و آنزیم ها به طور کلی از عملکرد دمای پایین (زیر 5 درجه) استفاده می کند.

به منظور جلوگیری از تخریب در حین استخراج پروتئین ، می توان بازدارنده های آنزیم پروتئولیتیک (مانند دی ایزوپروپیل فلوئورفسفات ، یدو استیک اسید و غیره) را اضافه کرد.



(2) روش استخراج حلال آلی

برخی از پروتئین ها و آنزیم ها که بطور محکم تری به لیپیدها متصل می شوند یا دارای زنجیره های جانبی غیر قطبی بیشتری در مولکول هستند ، در آب ، محلول های نمک رقیق ، اسیدهای رقیق یا مواد قلیایی رقیق حل نمی شوند.

از حلالهای آلی مانند اتانول ، استون و بوتانول می توان استفاده کرد. از خاصیت آب دوزی خاص و چربی دوست بودن قوی برخوردار است. این یک محلول ایده آل برای استخراج لیپوپروتئین است. اما باید در دمای پایین کار شود.


روش استخراج بوتانول به ویژه برای استخراج برخی از پروتئین ها و آنزیم هایی که به شدت به چربی ها متصل هستند ، برتر است. یکی اینکه بوتانول لیپوفیلیسیته شدیدی دارد ، خصوصاً توانایی آن در حل فسفولیپیدها. دیگر این که بوتانول هم آب دوستی دارد و هم در محدوده حلالیت است.

(درجه 10٪ ، 40 درجه 6.6٪ است) باعث عدم تجزیه و غیرفعال شدن آنزیم نمی شود. علاوه بر این ، روش استخراج بوتانول دارای طیف وسیعی از گزینه های pH و دما است و همچنین برای مواد حیوانی ، گیاهی و میکروبی مناسب است.


اقدامات احتیاطی برای استخراج و خالص سازی پروتئین:


هنگام تصفیه هر نوع پروتئین ، همیشه باید به حفظ ثبات آن و محافظت از فعالیت آن توجه کنید. برخی اقدامات احتیاطی کلی باید در خاطر داشته باشید. آنها عبارتند از:

1. عمل باید تا آنجا که ممکن است بر روی یخ یا در یک سردخانه قرار گیرد.

2. خیلی رقیق نباشید ، غلظت پروتئین را در میکروگرم / میلی لیتر ~ میلی گرم در میلی لیتر حفظ کنید.

3- pH مناسب ، مگر اینکه کروماتوگرافی متمرکز انجام شود ، محلول بافر استفاده شده باید از pH برابر با pI جلوگیری کند تا از رسوب پروتئین جلوگیری کند.

4- برای جلوگیری از تخریب پروتئین در پروتئین هدف ، از مهار کننده های پروتئاز استفاده کنید. هنگام تصفیه پروتئین در سلول ، DNase اضافه کنید تا DNA تخریب شود و از آلودگی DNA به پروتئین جلوگیری کند.

5- از جلوگیری از انجماد و ذوب و هم زدن شدید نمونه جلوگیری کنید تا از دناتوره شدن پروتئین جلوگیری شود.

6. اجزای محلول بافر تا حد امکان از محیط داخل سلول تقلید می کنند.

7. برای جلوگیری از اکسیداسیون پروتئین ، به محلول بافر 1 ol 1 mmol / LDTT (دیتیوتریتول) (یا β-مرکاپتواتانول) اضافه کنید.

8- برای جلوگیری از آسیب رساندن فلزات سنگین به پروتئین مورد نظر ، ماده شیمیایی 1 ~ 10 mmol / LEDTA اضافه کنید.

9. برای جلوگیری از رشد میکروارگانیسم ها از محلول استریل کننده استفاده کنید.

GeneralBiosystems می تواند خدمات بیان و تصفیه پروتئین سفارشی را برای پاسخگویی به بیشتر نیازهای تولید پروتئین شما فراهم کند.