خانه > اخبار > اخبار شرکت

روش های سنتز ژن

زمان بروزرسانی: 2020-08-25

منبع:

بازدید: 78

روش های سنتز ژن

روشهای سنتز ژن عمدتا شامل مونتاژ PCR ، PCR پسوند همپوشانی ، روش TBIO و روش PTDS می باشد.


基因 合成 服务 市场 综述 - 科技 频道 - 手机


قبل از سنتز ژن ، برای اینکه ژن ها بتوانند در سیستم های مختلف بیان بیولوژیکی به خوبی بیان شوند ، محققان معمولاً بهینه سازی کدونی را روی ژن ها انجام می دهند.

64 کد ژنتیکی وجود دارد ، اما بیشتر ارگانیسم ها تمایل به استفاده از برخی از این کدون ها دارند. به آنهایی که بیشتر استفاده می شود کدون بهینه و به آنهایی که مرتباً استفاده نمی شود کدون نادر یا کم مصرف گفته می شود.


در واقع هر ارگانیسم مورد استفاده برای بیان یا تولید پروتئین (از جمله E. coli ، مخمر ، سلول های پستانداران ، سلول های گیاهی و سلول های حشرات) درجه خاصی از ترجیح کدون را نشان می دهد.

بنابراین ، ممکن است بیان پروتئین های نوترکیب تحت تأثیر کدون ها باشد. تأثیر استفاده از کودک (به ویژه در سیستم های بیان ناهمگن).


بدون تغییر در پروتئین رمزگذار آن ، به فرآیند تغییر ژن رمزگذار یک پروتئین ، از بین بردن کدون های نادر و بهینه سازی مناسب ساختار ثانویه mRNA ، محتوای GC و غیره ، بهینه سازی کدون گفته می شود.

اصل بهینه سازی کدون انتخاب کدون های مختلف برای هر اسید آمینه در توالی پروتئین هدف با توجه به ترجیح کدونی سیستم بیان است که برای انجام ترکیب کل دنباله و یافتن بهترین مورد استفاده می شود.


1. سنتز آغازگر
پس از آنکه محققان توالی ژن مصنوعی را مطابق خواسته های خود تعیین کردند ، از آنجا که الگویی وجود ندارد ، ابتدا لازم است آغازگرها را بر اساس DNA دو رشته ای که باید سنتز شود ، طراحی و سنتز کنند.
در حال حاضر ، سنتز آغازگر اساساً روش فسفرآمیدیت فاز جامد را امتحان می کند. روش tryter فسفرامیدیت برای سنتز قطعات DNA دارای ویژگی های راندمان بالا ، اتصال سریع و واکنش دهنده های اولیه نسبتاً پایدار است.
2. تقویت PCR با آغازگرها به عنوان الگو
پس از سنتز آغازگرها ، آغازگرها به عنوان الگوهایی برای تقویت PCR عمل می کنند. اصل اساسی فن آوری PCR مشابه فرآیند تکثیر طبیعی DNA است و ویژگی آن به آغازگرهای الیگونوکلئوتیدی مکمل هر دو انتهای دنباله هدف متکی است.
3. تحول اتصال ، بازرسی و آزمایش باکتری ها
از طریق واکنش PCR ، DNA دو رشته ای مورد نیاز ما می تواند تقویت شود. اما پایداری محصول PCR کم است ، ما باید آن را به پلاسمید ببندیم ، آن را به حالت صحیح تبدیل کرده و یک شب در صفحه پهن کنیم. کلون های مثبت را می توان صبح روز بعد از صفحه انتخاب کرد. کلونهای انتخاب شده باید دوباره توسط PCR کلنی تأیید شوند تا بررسی شود که آیا درج ژن تمام طول وجود دارد یا خیر. PCR با پرایمرهای سر و دم انجام می شود. اگر محصولی وجود داشته باشد ، نشانگر وجود ژن هدف است. کلون های تایید شده به باکتری های لرزان کشت لوله آزمایش تبدیل می شوند و پس از آن پلاسمیدها استخراج ، خالص سازی و برای تعیین توالی ارسال می شوند.
4. توالی نسل اول
در حال حاضر ، ما از توالی نسل اول استفاده می کنیم که توالی سنگر نیز نامیده می شود. توالی سنگر با استفاده از DNA پلیمراز یک آغازگر متصل به الگویی از یک توالی معلق را گسترش می دهد تا زمانی که یک نوکلئوتید خاتمه دهنده یک زنجیره ترکیب شود. هر تعیین توالی از مجموعه ای از چهار واکنش جداگانه تشکیل شده است که هر کدام حاوی هر چهار تری فسفات دی اکسینوکلئوتید (dNTP) هستند که با مقدار محدودی از تری فسفات دی دی اکسینوکلئوتید (ddNTP) مخلوط شده اند.
5. تأیید کیفیت QC

نتیجه تعیین توالی با ژن هدف مقایسه می شود و تأیید هضم آنزیم QC همزمان انجام می شود. اگر نتیجه تعیین توالی و نتیجه تأیید هضم درست باشد ، سنتز ژن هدف به پایان می رسد. با توجه به مراحل فوق ، توالی ژنی حدود 800 جفت باز در مدت 5 روز و در شرایط صاف قابل سنتز است.