خانه > اخبار > اخبار صنعت

عوامل موثر بر تصفیه پروتئین های بافت گیاهی

زمان بروزرسانی: 2020-12-10

منبع:

بازدید: 29

عوامل موثر بر تصفیه پروتئین های بافت گیاهی

گیاهان مشکلات خاصی در تصفیه پروتئین دارند ، باعث می شوند که عملکرد پروتئین در واحد حجم کمتر از حیوانات یا پروکاریوت ها باشد و تخریب بافت ها ، تداخل در تصفیه و وجود مواد طبیعی با اثرات اکسیداتیو می تواند بر فعالیت آنزیم تأثیر بگذارد.

مهم است که منبع مواد و روش مناسب تکه تکه شدن بافت را به دقت انتخاب کنید. هنگامی که پروتئین به شکل قابل تفکیک درآمد ، پروتئین گیاهی می تواند مانند سایر پروتئین ها با استفاده از روش های تصفیه عمومی پردازش شود.

purification of plant tissue proteins

غلظت پروتئین کم


برخلاف اکثر ارگانیسم ها ، مقدار زیادی ماده جامد در گیاهان پروتئین نیست بلکه مواد ماکرومولکولی دیگری از جمله نشاسته ، سلولز ، پکتین و همی سلولز و پلی فنول است.

همگن سازی اولیه باید در مقدار زیادی بافر برای تصفیه اولیه انجام شود. مقدار زیادی از مواد نامحلول به دلیل اثر ژل یا اثر جذب ساده بر فیلتراسیون تأثیر می گذارند.

بنابراین ، در ابتدا فقط یک غلظت کم پروتئین می توان بدست آورد که باید رسوب یا غلیظ شود. پس از همگن سازی ، از رسوبات سولفات آمونیوم و رسوب PEG معمولاً برای پروتئین های گیاهی استفاده می شود.

اگر از اولترافیلتراسیون برای غلظت استفاده شود ، برای جلوگیری از اثرات منفی باید توانایی اتصال پروتئین گیاهی به غشا را در نظر گرفت.


پروتئولیز


تصفیه پروتئین گیاهی گاهی اوقات با مشکل پروتئولیز همراه است ، که اغلب با کاهش غلظت اولیه پروتئین همراه است ، که ممکن است به دلیل طولانی بودن زمان کار مرحله اولیه یا وجود پروتئاز باشد.

آنزیم های اصلی پروتئولیتیک موجود در گیاهان شامل پروتئینازهای سرین ، پروتئینازهای سیستئین و متالوپروتئازها هستند و می توان از بازدارنده های مربوطه استفاده کرد. 1 mmol / L PMSF برای مهار پروتئینازهای سرین مناسب است.


مهار و قهوه ای شدن


بسیاری از بافتهای گیاهی غنی از اکسیدازها هستند ، که بر روی لایه های درون زا عمل می کنند و محصولات فعال تولید می کنند ، که پس از واکنش با آنزیم ها ، که ممکن است بخشی از مکانیسم دفاع طبیعی گیاهان باشد ، آنها را غیرفعال می کند. پلی فنول اکسیداز در بسیاری از گیاهان مانند سیب زمینی ، سیب ، موز و چغندرقند وجود دارد و باعث واکنش های قهوه ای شدن می شود ، خصوصاً وقتی تیروزین آزاد وجود دارد.


در گیاهان دیگر مانند لوبیا ، مقدار زیادی پراکسیداز که در هنگام شکستن بافت آزاد می شود نیز می تواند باعث واکنش قهوه ای شود. واکنش قهوه ای شدن را می توان با حذف سوبسترا یا مهار اکسیداز کاهش داد.

برای حذف بستر واکنش می توان از رزین کاتیونی (مانند Dowe res 1 × 2) یا رزین کنش متقابل آبگریز (مانند Am berlite XAD-2) استفاده کرد. مهارکننده واکنش می تواند تیول ، 2-مرکاپتواتانول یا دیتیوتریتول ، یا اسید اسکوربیک باشد (اما به تأثیر آن بر روی pH بافر همگن توجه کنید) یا متابیسولفیت سدیم.