خانه > اخبار > اخبار صنعت

انواع سیستم بیان E. coli

زمان بروزرسانی: 2021-02-03

منبع:

بازدید: 43

انواع سیستم بیان E. coli
سیستم بیان E. coli پرکاربردترین سیستم بیان پروتئین است. حدود 30٪ از محصولات پروتئینی نوترکیب موجود در بازار توسط سیستم E. coli تولید می شود. سیستم بیان E. coli از Generalbiosystems تقریباً سه نوع بیان دارد.

1. بیان E.coli T7


T7 E. coli ژن هدف را در سطح بالاتری بیان می کند. اما اگر ژن هدف برای E. coli سمی باشد ، بر رشد سلول تأثیر می گذارد. بیان T7 E. coli یک سیستم بیان است که با پروموتر T7 و عناصر سیستم رونویسی فاژ T7 ساخته شده است. T7 RNA پلیمراز یک RNA پلیمراز بسیار فعال است.

سرعت سنتز mRNA پنج برابر RNA پلیمراز در E. coli است. برخی از توالی هایی که توسط E. coli RNA پلیمراز قابل رونویسی نیستند نیز می توانند رونویسی شوند. بنابراین ، T7 RNA پلیمراز و T7 در حضور پروموتر فاژ ، سیستم رونویسی E. coli خود نمی تواند با سیستم رونویسی فاژ T7 رقابت کند و در نهایت پروموتر فاژ T7 رونویسی پروتئین را کنترل می کند.


2. سیستم بیان Lac و Tac E. coli


سیستم بیان Lac و Tac Escherichia coli یک سیستم بیان است که بر اساس مکانیسم تنظیم اپرون لاک اشریشیا کلی طراحی و ساخته شده است. اپرون شلاک دارای ساختاری پلی سیسترونیک است. در غیاب یک القا کننده ، عامل تنظیم کننده منفی محصول ژن lacI محکم به اپراتور پایین دست پروموتر متصل می شود و رونویسی بافت را آغاز می کند.


در حضور القا کننده IPTG ، پس از اتصال به سرکوبگر ، توانایی اتصال به اپرون کاهش یافته و جدا می شود ، در نتیجه رونویسی اپرون لاک فعال می شود. سیستم بیان ساخته شده با پروموتر tac را سیستم بیان Tac می نامند.


به منظور تنظیم دقیق سیستمهای بیان Lac و Tac ، یک lacIq جهش یافته از ژن lacI که می تواند پروتئین سرکوبگر lacI بیش از حد تولید کند ، در سیستم بیان اعمال می شود. با این حال ، هنگامی که بردار بیان با استفاده از کپی های با کپی بالا ساخته شد ، سطح بالاتری از رونویسی در زمینه مشاهده می شود و ژن lacIq برای اطمینان بیشتر از تولید پروتئین سرکوبگر lacI ، در بردار بیان قرار می گیرد.


3. سیستم بیان PL و PR E. coli


سیستم ساخته شده با مروجین اولیه رونویسی PL و PR فاژ لامبدا به عنوان هسته ، سیستم بیان PL و PR E. coli نامیده می شود. PL و PR مروج توانایی بالایی در آغاز رونویسی دارند.

استفاده از آنها برای ساخت بردارهای بیان در اوایل توسعه سیستم بیان E. coli پیشنهاد و بررسی شده است. این سیستم بیان بر اساس محصول ژنی جهش یافته cl857 حساس به دما برای تنظیم رونویسی از مروج PL و PR است.

محصول ژنی در دمای پایین تر (30 درجه سانتیگراد) به شکل فعال وجود دارد و در درجه حرارت بالاتر (42 درجه سانتیگراد) از دست می رود. زنده. این بردار بیان در E. coli معمولی کاملاً ناپایدار است ، که ناشی از رونویسی مستقیم با مقاومت بالا از PL یا PR است بدون محصول ژن cl در باکتری ها.


يكي از راه هاي حل اين مشكل استفاده از فاژ اشريشيا كولي لامبدا ليزدا به عنوان باكتري ميزبان براي بردارهاي بيان پروموتر PL و PR است. روش دوم جمع آوری ژن cI857ts بر روی بردار بیان است ، به طوری که می تواند بزرگتر باشد دامنه انتخاب باکتری میزبان.


از آنجا که سیستمهای بیان PL و PR نیازی به افزودن القا indکنندههای شیمیایی در هنگام القای ندارند و هزینه آن کم است ، در اولین پروتئینهای نوترکیب دارویی تهیه شده در سیستم E. coli همه از این سیستم بیان استفاده می کنند. با این وجود کاستی های خاص خود را نیز دارد.


اول از همه ، در طی فرآیند تحریک گرما ، بیان پروتئین شوک حرارتی E. coli نیز فعال می شود ، از جمله آنزیم های پروتئولیتیک ، بنابراین ممکن است پروتئین نوترکیب بیان شده را تخریب کند.

ثانیا ، هنگام تخمیر و کشت باکتریها در حجم زیاد ، افزایش دمای کشت از 30 درجه سانتیگراد به 42 درجه سانتیگراد نسبتاً کند است. این نوع روش گرمایش ممکن است اثر القا و بیان پروتئین نوترکیب را تحت تأثیر قرار دهد.


برای نیاز به بیان E. coli ، لطفاً با Generalbiosystems - شرکت بیان پروتئین تماس بگیرید.