خانه > اخبار > اخبار شرکت

تجزیه و تحلیل مشکلات رایج در بیان پروتئین پروکاریوتی

زمان بروزرسانی: 2021-03-04

منبع:

بازدید: 17

تجزیه و تحلیل مشکلات رایج در بیان پروتئین پروکاریوتی

بیان پروکاریوتی به روش ساخت بردار بیان و معرفی ژن هدف خارجی به سویه بیان از طریق فن آوری شبیه سازی ژن گفته می شود ، به طوری که می تواند در ارگانیسم یا سلول پروکاریوتی خاص بیان شود. سیستم بیان پروتئین پروکاریوتی در حال حاضر متداول ترین و اقتصادی ترین روش بیان پروتئین است. سیستم بیان اشریشیا کلی یکی از پرکاربردترین سیستم های بیان پروتئین پروکاریوتی است.

Escherichia coli expression system Features

یک سیستم بیان کامل معمولاً شامل بردارهای بیان و فشارهای بیان است. اگر یک عبارت خاص القا شده باشد ، شامل یک القا کننده نیز می شود و بیان همجوشی نیز شامل یک سیستم تصفیه یا تشخیص برچسب است. انتخاب سیستم بیان معمولاً به هدف آزمایش مانند سطح بیان ، فعالیت پروتئین هدف ، روش تصفیه محصول بیان و غیره بستگی دارد. در زیر مشکلات رایج در روند بیان پروکاریوتی معرفی می شود.

 

س: چرا پروتئین هدف همیشه به شکل اجسام شامل می شود؟

الف: در بیان و تصفیه پروکاریوتی ، پروتئین هدف اغلب به اشتباه جمع می شود و در بدن های جمع کننده تجمع می یابد. پس از القا ، بیان پروتئین هدف معمولاً می تواند به بیش از 50٪ پروتئین سلول کامل برسد.

اگرچه بخش مشخصی از پروتئین به شکل محلول وجود دارد ، اما تا حدود 95٪ پروتئین در بدن های انسداد وجود دارد. به منظور بدست آوردن پروتئین محلول بیشتر ، در طول آزمایش ، می توان دمای القا low را کاهش داد ، به عنوان مثال ، 16-30 درجه سانتیگراد ، یا غلظت IPTG (0.01-0.1 میلی متر) کاهش یافته و مدت زمان القای طولانی می شود. از یک محیط ویژه نیز می توان برای پرورش باکتری ها استفاده کرد.



س: چرا بیان پروتئین های غشایی دشوار است؟

پاسخ: میزان موفقیت نسبتاً پایین بیان پروتئین غشایی یک مشکل رایج است. ممکن است دو دلیل اصلی وجود داشته باشد:

 

1. پروتئین های غشایی به طور کلی از مولکول های اسید آمینه آبگریز قوی و مولکول های آب دوست ساخته شده اند که به صورت پرش به هم متصل می شوند و ساده ترین ساختار شیمیایی آب و غشایی آب دوست و آبگریز را تشکیل می دهند ، که شبیه ساختار پپتیدهای سیگنال است.

برای سلولهای پروکاریوتی ، اندامکهای ساده به سختی می توانند روند پیچیده شناخت و برداشتن پپتید سیگنال را به پایان برسانند ، و شبکه آندوپلاسمی و دستگاه گلژی را برای بسته بندی مجدد و ترشح مانند سلولهای یوکاریوتی هدایت می کنند. برخی پروتئین ها چندین بار از غشا عبور می کنند. برای سلولهای پروکاریوتی انجام سلول تقریباً غیرممکن است.


2- برای قطعات آبگریز ، بدن های انسداد به راحتی در بیان سلول های پروکاریوتی تشکیل می شوند. پپتیدهای آبگریز می توانند روند ترجمه را مهار کرده و حتی با ساختار غشای پروکاریوتی ترکیب شوند و سمیت ایجاد کنند. در غریزه محافظت از خود بیولوژیکی ، تمام اندامک ها روند سنتز پروتئین را متوقف می کنند.

 

اگر به این موضوع علاقه دارید ، لطفاً مقاله جدید Generalbiosystems را در مورد تجزیه و تحلیل مشکلات رایج در بیان پروتئین پروکاریوتی دنبال کنید.